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metadata.dc.type: Dissertação
Title: Relação filogenética, por ITS-rDNA, de Colletotrichum spp., agente causal da mancha foliar da gala em macieira
Other Titles: Phylogenetic relationship by ITS-rDNA of Colletotrichum spp. causal agent of apple glomerella leaf spot
metadata.dc.creator: Ribeiro, Diorvania Cardoso
metadata.dc.contributor.advisor1: Guidolin, Altamir Frederico
metadata.dc.description.resumo: A maçã é a fruta de clima temperado de maior dispersão, consumo e a mais comercializada como fruta fresca em todo o mundo. A produção de maçã no Brasil tem sido comprometida pela incidência de várias doenças, das quais a Mancha Foliar da Gala (MFG), cujo agente causal são espécies de Colletotrichum spp., tem sido, atualmente, uma das maiores preocupações dos produtores e pesquisadores. A origem desta doença em macieira ainda não está bem esclarecida e a utilização de estudos baseados na filogenia permitem relacionar os organismos evolutivamente, caracterizando possíveis mecanismos de divergência evolutiva e a origem do patógeno, contribuindo na adoção de medidas de controle e prevenção quanto ao surgimento de novas raças. O presente trabalho objetivou estudar a variação do DNA ribossomal, (rDNA) entre isolados de Colletotrichum spp. patogênicos em macieira, em citros e goiaba serrana. Todos os isolados foram cultivados em meio BDA, por uma semana a 24oC. A amplificação do rDNA foi realizada utilizando-se iniciadores ITS1 e ITS4, seguida pela digestão da região ITS (espaçador interno transcrito) com enzimas de restrição (Rsa I, Alu I, Hinf I, Hpa II, Hha I, Xho I, Acc I, Eco RI e Taq I). Os produtos obtidos na amplificação da região ITS1-5,8S-ITS2 do rDNA revelaram um fragmento de aproximadamente 600 pares de bases (pb), para todos os isolados analisados. Todos os fragmentos amplificados foram clivados, obtendo uma grande variação, a qual foi de 90 a 500 pb. Utilizando a técnica de ARDRA (Amplified Ribosomal DNA Restriction Analysis) foi possível separar e agrupar os isolados em haplótipos, a qual foi eficiente para a correlação entre haplótipo e hospedeiros, agrupando em um mesmo haplótipo isolados do mesmo hospedeiro. O fragmento amplificado foi purificado com kit QIAquick Gel Extraction Kit 250 (Qiagen, Hilden, Germany) e as amostras foram seqüenciadas na região ITS do rDNA de todos os isolados. As seqüências foram alinhadas no software ClustalW e a árvore filogenética foi construída no software Mega 3.1. Com o seqüenciamento de DNA foi possível inferir sobre a possível espécie de fungo que pertence o segmento de DNA analisado. A região ITS do rDNA mostrou-se muito eficaz para estudos de filogenia. A partir da árvore filogenética foi possível agrupar os isolados de Colletotrichum por espécies, independente do seu hospedeiro. Todas as seqüências obtidas apresentaram valores superiores a 93% de similaridade, fato esse, que reforça que o Colletotrichum spp., causador da MFG, possui relações de parentesco com o isolados de Colletotrichum spp. isolados de citros e de goiaba serrana
Abstract: The apple is a temperate clime fruit with larger dispersion, consumption and the more marketed all over the world as fresh fruit. The apple production has been committed by the incidence of diseases, in which Apple Leaf Spot (ALS), whose causal agent is the Colletotrichum spp. Nowadays this disease is one of the largest concerns of the producers and researchers. The origin of this disease in apple tree plants is not still well known. Studies based on the phylogeny allow to relate evolutionarily the organisms and characterize possible divergence mechanisms origin. This will contribute in disease control and prevention of new races sprout. The objective of this work was to study the variation of the ITSs rDNA among apple tree pathogenic isolates of Colletotrichum spp. from apple, citrus and feijoa. All isolates were first cultivated on PDA, for one week at 24oC. In the PCR amplification of the rDNA was used initiators ITS1 and ITS4. The amplified fragment was digested with restriction enzymes (Rsa I, Alu I, Hinf I, Hpa II, Hha I, Xho I, Acc I, Eco RI and Taq I). The revelation was in 2% agarose gel. It was obtained a great variation with products of the cleaved PCR products, from 90 to 500 pb. The amplified fragment was purified (QIAquick Gel Extraction Kit 250 - Unisciense of Brazil) and the fragment (ITS of the rDNA) was sequenced for all isolates. The sequences were aligned with the ClustalW software and the phylogenetic tree was constructed in the Mega 3.1 software. The products obtained in the PCR amplification of the rDNA region (ITS1-5,8S-ITS2), with the initiators pair ITS1 and ITS4 revealed a fragment with approximately 600 pb, for all the isolated analyzed. Through the analysis for the ARDRA was possible to separate isolates groups in haplotypes, which was efficient for the correlation between haplotypes and hosts, containing in a same haplotypes of the same host. It was possible to group the isolates of Colletotrichum in species, using the phylogenetic tree, independent of his host. All of the obtained sequences presented more than 93% of similarity, fact that reinforces the hypothesis that the Colletotrichum spp., causal agent of ALS, is nearly related with citrus and feijoa Colletotrichum
Keywords: macieira
Colletotrichum spp.
filogenia molecular
ITS, rDNA
apple
Colletotrichum spp.
phylogeny
ITS, rDNA
metadata.dc.subject.cnpq: CNPQ::CIENCIAS AGRARIAS::AGRONOMIA
metadata.dc.language: por
metadata.dc.publisher.country: BR
Publisher: Universidade do Estado de Santa Catarina
metadata.dc.publisher.initials: UDESC
metadata.dc.publisher.department: Produção Vegetal
metadata.dc.publisher.program: Mestrado em Produção Vegetal
Citation: RIBEIRO, Diorvania Cardoso. Phylogenetic relationship by ITS-rDNA of Colletotrichum spp. causal agent of apple glomerella leaf spot. 2007. 74 f. Dissertação (Mestrado em Produção Vegetal) - Universidade do Estado de Santa Catarina, Lages, 2007.
metadata.dc.rights: Acesso Aberto
URI: http://tede.udesc.br/handle/handle/1260
Issue Date: 26-Feb-2007
Appears in Collections:Mestrado em Produção Vegetal

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